德國(guó)Lavision Biotec 雙光子熒光顯微鏡TriM Scope

雙光子吸收/激發(fā)技術(shù)的原理：

在強(qiáng)光激發(fā)下,，分子同時(shí)吸收兩個(gè)光子，從基態(tài)躍遷到兩倍光子能量的激發(fā)態(tài)的過程,。兩個(gè)光子可以是相同波長(zhǎng)的,，也可以是不同波長(zhǎng)的，但必須是同時(shí)吸收（兩個(gè)光子到達(dá)被激發(fā)分子的時(shí)間間隔小于1飛秒）,?？梢赃@樣理解，先吸收一個(gè)光子的能量躍遷到一個(gè)虛擬的中間態(tài),，然后再吸收一個(gè)光子的能量躍遷到激發(fā)態(tài),。



LaVision BioTec的雙光子顯微鏡TriM Scope的優(yōu)勢(shì)（同類產(chǎn)品中的優(yōu)點(diǎn)）:

☆ 的多光束快速掃描模式：用戶可根據(jù)需要調(diào)節(jié)光束模式從傳統(tǒng)的單光束掃描模式到La Vision BioTec的多光束快速掃描模式，即1,、2,、4、8,、16,、32、64束光的不同模式選擇,。多光束平行掃描技術(shù)是指入射光經(jīng)過分光器,，分解為64束光，同時(shí)進(jìn)入顯微鏡,，通過物鏡聚焦在樣品上,，通過XY掃描器利用這64束光同時(shí)進(jìn)行掃描，并調(diào)整Z軸進(jìn)行三維成像,，保證的樣品損傷的同時(shí)極大地提高了掃描速度。

☆ 一個(gè)可用軟件調(diào)節(jié)的雙光子顯微鏡：ImSpector Pro軟件支持了的掃描模式,，并且支持用戶在ms毫秒之內(nèi)切換掃描區(qū)域,。因此，TriM Scope 是研究光活化,、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想工具,。

☆ 同類產(chǎn)品中具有的檢測(cè)效率：TriM Scop可以支持最多達(dá)8個(gè) non-descanned PMT, NDD可以是cooled generation III GaAsP PMT或者APD detector可以多傳輸40%效率的量子，比同類產(chǎn)品具備更佳的檢測(cè)效率,。

☆ 世界上能夠支持OPO技術(shù)的顯微鏡：OPO技術(shù)– 紅光和蛋白的激發(fā)：經(jīng)典的Ti:Sa激光器成像紅光的能力是非常有限的,，因?yàn)榻?jīng)典的激發(fā)波長(zhǎng)是1125到1250 nm, 并不在Ti:Sa激光器的轉(zhuǎn)換范圍之類,。OPO技術(shù)解決了這個(gè)問題，因?yàn)樗軅鬏斂烧{(diào)的fs激光脈沖到>1100 nm的范圍,。

雙光子顯微鏡相對(duì)于共聚焦等其他顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)：

☆ 光損傷?。河捎陔p光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源，這一波段的光對(duì)活體細(xì)胞和組織的光損傷小,，適用于長(zhǎng)時(shí)間的研究,；

☆ 穿透能力強(qiáng)：相對(duì)于紫外光，可見光和近紅外光都具有更強(qiáng)的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小,，解決對(duì)生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題；研究表明,，共聚焦熒光成像的成像深度一般在50微米左右,，而雙光子顯微鏡的成像深度可達(dá)1000微米；

☆ 高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光,，雙光子吸收僅局限于焦點(diǎn)處的體積約為波長(zhǎng)3次方的范圍內(nèi)；

代雙光子顯微鏡：LaVision BioTec革新的技術(shù)提供了的雙光子顯微鏡-TriM Scope I：

☆ 用戶可根據(jù)需要調(diào)節(jié)光束模式：從傳統(tǒng)的單光束掃描模式到La Vision BioTec的多光束快速掃描模式,，即1,、2、4,、8,、16、32,、64束光的不同模式選擇,。快速掃描模式即可保證可允許64束光同時(shí)掃描,，并且保證的樣品損傷,，主要有下面三個(gè)原因:

? 64束光能夠提供單光束的64倍熒光強(qiáng)度并且保證低損傷高熒光強(qiáng)度

? 保證了高的幀速率

? CCD攝像頭比PMTs更高靈敏度

☆ TriM Scope 可以提供最多達(dá)8個(gè)NDD攝像頭給經(jīng)典的單光束掃描顯微鏡，2個(gè)CCD攝像頭,，1個(gè)TCSPC 探測(cè)器為FILM（Fluorescence Lifetime Imaging Microscope ）測(cè)量,。3 個(gè)NDD可以安裝到靠近物鏡的位置，2個(gè) NDD可以插入到傳送器,。

☆ LaVision BioTec的ImSpector Pro軟件支持了的掃描模式,，并且支持用戶在ms毫秒之內(nèi)切換掃描區(qū)域。因此,，TriM Scope 是研究光活化,、光釋放和光漂白（photo activation, uncaging and FRAP ）的理想工具。

☆ TriM Scope 還可以結(jié)合1個(gè)OPO使用，OPO可以轉(zhuǎn)換Ti:Sa激光器的波長(zhǎng)從800-880 nm轉(zhuǎn)變到1100-1300 nm,。因此紅光染料或者蛋白質(zhì)可以被有效地激發(fā)出雙光子,，保證了很低的漂白率和最深的穿透深度。LaVision BioTec可以同時(shí)使用Ti:Sa激光和OPO來掃描,，就能同時(shí)激發(fā)出綠/黃和紅光,。