凍存細(xì)胞如何有效復(fù)蘇,？

一般來(lái)說，細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移,，最佳的方法是進(jìn)行低溫保存（-70℃~-196℃）,，而細(xì)胞進(jìn)行低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止,，即代謝處于停止?fàn)顟B(tài),，故而可以長(zhǎng)期保存。

細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵在于0~20℃階段的處理過程,，因?yàn)樵诖藴囟确秶鷥?nèi),，冰晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷,。

所以復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，避免緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶,，對(duì)細(xì)胞造成損傷,。

1）所需材料

· 含有細(xì)胞的凍存管；

· 37℃水浴鍋,；

· 37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,；

2）細(xì)胞的復(fù)蘇流程

1．佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出冷凍管,；

2．迅速放入37℃水浴中,，并不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其融化,，然后在無(wú)菌下取出細(xì)胞,；

3．在150g速度下離心5～10分鐘，棄去上層液,；

4．加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,，接種濃度1×10 ⁹ cell/L，置37℃恒溫箱靜置培養(yǎng),；

5．次日更換一次培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況,；

6．若細(xì)胞密度較高,，及時(shí)傳代。

3）注意事項(xiàng)

在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,，要不時(shí)搖動(dòng)冷凍管,，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高,，生長(zhǎng)及形態(tài)良好,。

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