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如何正確操作使用蛋白純化填料,?

閱讀:615      發(fā)布時間:2023-6-26
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  蛋白質(zhì)是細胞的重要組成部分,對維持生命活動起著至關(guān)重要的作用,。為了進一步對蛋白質(zhì)進行研究和利用,,需要對其進行純化,純化是從混合樣品中分離出目標蛋白質(zhì)的過程,。而蛋白純化填料作為純化過程中*重要組成部分,,起著至關(guān)重要的作用,主要是是指用于吸附和分離蛋白質(zhì)的固相填料,,通常包括離子交換樹脂,、親和層析樹脂、凝膠過濾材料等,。其中,,離子交換樹脂和親和層析樹脂是目前應用廣泛的純化填料。
 
  離子交換樹脂是指具有陰、陽離子交換基團的樹脂,,可以根據(jù)蛋白質(zhì)表面所帶的電荷性質(zhì),,選擇相應的陰、陽離子交換樹脂進行選擇性吸附和分離,。離子交換樹脂操作簡單,、效率高、適用范圍廣,,但可能會造成蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)損傷和純化效果不理想等問題,。
 
  親和層析樹脂則是根據(jù)蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合性,通過選用匹配的親和劑進行選擇性吸附和分離,。比如,,親和層析樹脂可以利用抗體來選擇性吸附和純化所需的蛋白質(zhì),也可以利用金屬離子和His標記來選擇性吸附和純化蛋白質(zhì),。親和層析樹脂具有選擇性強,、結(jié)構(gòu)損失小等優(yōu)點,但成本較高,。
 
  除此之外,還有凝膠過濾材料,,其通過蛋白質(zhì)在凝膠孔洞中的分子大小,、形狀等性質(zhì)的差異進行選擇性純化。凝膠過濾材料可根據(jù)自身需要進行不同孔徑的填充,,由于對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)影響小,,因此也被廣泛應用于蛋白質(zhì)純化中。
 
  蛋白純化填料使用時需注意:
 
  1.定期更換緩沖液:選擇合適的緩沖液和保護劑,,定期更換,。
 
  2.定期清洗填料:采用PH調(diào)節(jié)、超聲波,、化學法等方法,,去除阻塞物和雜質(zhì)。
 
  3.避免高溫,、干燥:避免填料暴曬于陽光下,,避免高溫、干燥造成填料的老化和破壞,。
 
  4.避免受力過大:避免填料受到過大的擠壓和撞擊,。
 
  5.定期檢查:定期檢查填料的狀態(tài)和性能,避免使用失效或損壞的填料,。

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