蛋白純化填料要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,，利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染,，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái),。每種蛋白間的大小,、形狀、電荷,、疏水性,、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白,。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段,。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA、RNA等分開(kāi),，由于此時(shí)樣本體積大,、成分雜，要求所用的樹(shù)脂高容量,、高流速,，顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開(kāi)，防止目的蛋白被降解,。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率,，此階段是要把目的蛋白與那些大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開(kāi)來(lái)，要用更小的樹(shù)脂顆粒以提高分辨,。
蛋白純化填料系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)步驟：
1.如果凝膠過(guò)濾的介質(zhì)是干粉,，則需在凝膠過(guò)濾緩沖液中溶脹。
2.在遠(yuǎn)離過(guò)往通道及直接光照的恒溫環(huán)境,，將層折柱垂直安裝在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)室支架上,。
3.用一注射器將凝膠過(guò)濾緩沖液從柱子的輸出管注入柱子，至緩沖液達(dá)到柱子支持體平面之上,，注射器留在輸出端以堵住柱子,。
4.沿著一根順柱子內(nèi)壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設(shè)高度，再小心往凝膠頂部加入1 cm 高的一層緩沖液,，并連接緩沖液貯存容器,，取去堵著柱子輸出管的注射器，用2~3倍柱床體積的緩沖液請(qǐng)洗柱子,。
5.流盡柱子凝膠頂部上面的緩沖液,、關(guān)閉其輸出管。
6.加入相當(dāng)于柱床體積1%~5%的蛋白質(zhì)樣品,。開(kāi)放輸出管，讓樣品流進(jìn)柱床,，凝膠上面的柱子內(nèi)壁以緩沖液沖洗,。
7.在凝膠頂上用吸管加入1 cm 高的緩沖液層，重新與緩沖液貯存容器連接,，開(kāi)始洗脫。
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