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牛球蟲?。–occidiosis）ELISA試劑盒

                                                           (ELISA) 使用說明書

?牛球蟲病（Coccidiosis）ELISA試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關液體樣本中球蟲?。–occidiosis）的含量。

? 有效期：6個月

? 保存條件：2-8℃

? 本試劑盒僅供科研使用,，不得用于臨床診斷

實驗原理實驗

牛球蟲?。–occidiosis）試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將待測物質和生物/素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系,。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

樣品收集,、處理及保存方法

1）血清 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2）血漿 EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液 1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物,。

4）組織勻漿 將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g 離心 10 分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。

備注：

1. 標準品濃度依次為：80,、40、20,、10,、5、2.5 U/L

2. 經過大量正常標本檢驗,，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,，可用樣本/稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗,。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

操作步驟

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃,。

2. 設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL,；

3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加,。

4. 除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min,。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置 1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物 A,、B 各 50μL,，37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50μL,，15min 內,，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

試劑盒安全性

1）避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
2）實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標,，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度,。

注意事項

1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質,。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7）底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9）按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

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