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人血管活性肽酶抑制劑(VPI)ELISA試劑盒

                                                           (ELISA) 使用說明書

?人血管活性肽酶抑制劑(VPI)ELISA試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中血管活性肽酶抑制劑(VPI)的含量,。

? 有效期：6個月

? 保存條件：2-8℃

? 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

實驗原理實驗

人血管活性肽酶抑制劑(VPI)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測,。先將待測物質(zhì)和生物/素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

樣品收集,、處理及保存方法

1）血清 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2）血漿 EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒,。

3）細(xì)胞上清液 1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物,。

4）組織勻漿 將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g 離心 10 分鐘,，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

注：標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測,。

備注：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：80、40,、20,、10、5,、2.5 U/L

2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,，可用樣本/稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回 4℃,。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL,；

3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL,；空白孔不加,。

4. 除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min,。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置 1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,，37℃避光孵育 15min,。

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi),，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

試劑盒安全性

1）避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。
2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

實驗結(jié)果計算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。

注意事項

1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存,。
2）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9）按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

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