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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
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貨號 | YLK-5075E | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研實驗 | 樣本 | 血清,、血漿及相關液體樣本 |
適用物種 | 人,、大鼠、小鼠,、植物、動物等 | 檢測方法 | 雙抗體夾心法 |
保存條件 | 2-8℃ | 有效期 | 6個月 |
人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒
(ELISA) 使用說明書
?人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)的含量,。
? 有效期:6個月
? 保存條件:2-8℃
? 本試劑盒僅供科研使用,,不得用于臨床診斷
實驗原理實驗
人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物/素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,,和酶結合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。
試劑盒組成
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
樣品收集,、處理及保存方法
1)血清 操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2)血漿 EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒,。
3)細胞上清液 1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿 將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g 離心 10 分鐘,,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
注:標本溶血會影響最后檢測結果,,因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
備注:
1. 標準品濃度依次為:80、40、20,、10,、5、2.5 U/L
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗,,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,,可用樣本/稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗,。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃,。
2. 設置標準品孔和樣本孔,,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL,;空白孔不加,。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置 1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復洗板 5 次(也可用洗板機洗板),。
6. 每孔加入底物 A,、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min,。
7. 每孔加入終止液 50μL,,15min 內,在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值,。
試劑盒安全性
1)避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,,請盡快用水沖洗,。
2)實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,,計算出樣品的濃度,。
注意事項
1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存。
2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質。
3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7)底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應一致,,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
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