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人乳腺癌成纖維細胞永生化

細胞特性：

1) 細胞來源于手術(shù)切除的乳腺癌組織,。

2) 細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。

3) 不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌,。

4) 細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養(yǎng),。

運輸和保存：

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

我們推薦使用該細胞專用培養(yǎng)基作為體外培養(yǎng)人*乳腺癌成纖維細胞永生化細胞的培養(yǎng)基。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，完培重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

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