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HGC-27+YFP 人胃癌細胞（黃色熒光標記）

細胞特性：

1） 來源：人胃癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染YFP的細胞,，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其YFP熒光強度會逐漸減弱,。若實驗要求需要維持熒光強度,，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。         建議收到細胞后至少傳3代,，凍存留種后再進行篩選,。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養(yǎng),，若無細胞漂浮或者漂浮較少,，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續(xù)篩選，以此類推,，至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%,，則停止篩選,，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%,，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選,。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選,，用不含藥完培正常培養(yǎng),。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，完培重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

HGC-27+YFP 人胃癌細胞（黃色熒光標記）

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