目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞系>> 復(fù)蘇/凍存HGC-27+YFP 人胃癌細(xì)胞(黃色熒光標(biāo)記)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
---|---|---|---|
貨號 | YLK-XB1622h | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | HGC-27+YFP |
HGC-27+YFP 人胃癌細(xì)胞(黃色熒光標(biāo)記)
細(xì)胞特性:
1) 來源:人胃癌
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,,貼壁生長
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
細(xì)胞篩選
該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染YFP的細(xì)胞,,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,,其YFP熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選,。 建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選,。
初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續(xù)篩選,,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過程中,,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),,至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選,。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,,可停止篩選,,用不含藥完培正常培養(yǎng)。
運(yùn)輸和保存:
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。
細(xì)胞接收后的注意事項(xiàng):
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完培6-8mL,,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收,。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,;雙抗,1%,。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。
細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,,完培重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
HGC-27+YFP 人胃癌細(xì)胞(黃色熒光標(biāo)記)
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