大鼠胚胎干細胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠胚胎干細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1275h
組織來源 ：囊胚組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
胚胎干細胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細胞(Em bryonic stem cell,，ESC s,，簡稱ES、E K 或E SC 細胞)是早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來的一類細胞,，它具有體外培養(yǎng)無限增殖,、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,，ES細胞都能被誘導分化為機體幾乎所有的細胞類型,。進一步說，胚胎干細胞(ES細胞)是一種高度未分化細胞,。它具有發(fā)育的全能性,，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細胞,。
ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態(tài)結(jié)構,，細胞核大，有一個或幾個核仁,，胞核中多為常染色質(zhì),，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構簡單,。體外培養(yǎng)時,，細胞排列緊密，呈集落狀生長,。用堿性磷酸酶染色,，ES細胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細胞呈淡黃色,。細胞克隆和周圍存在明顯界限,，形成的克隆細胞彼此界限不清,，細胞表面有折光較強的脂狀小滴。細胞克隆形態(tài)多樣,，多數(shù)呈島狀或巢狀,。小鼠ES細胞的直徑7微米～18 微米，豬,、牛,、羊ES細胞的顏色較深，直徑12微米～18微米,。胚胎干細胞與普通細胞有顯著差別,，有其特定的生長特性和特定的標志，例如堿性磷酸酶活性非常高,，帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specificem bryonic antigen s,SSE A ),，人類胚胎干細胞還帶有高分子量的糖蛋白T R A 1-60、T R A -1-81等標志,，這些特性和標志均可以用于對胚胎干細胞進行鑒定,，除此之外，胚胎干細胞還可以在體外永jiu傳代,，并保持正常核型,。
在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子(Leukaemiainhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層(M EF)上培養(yǎng)時，胚胎干細胞都能呈克隆性增殖,，長期保持核型正常和穩(wěn)定,，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外,，胚胎干細胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性,，目前證明 端粒酶與細胞衰老密切相關，多數(shù)成熟細胞的端粒酶活性都很低,。這些都是胚胎干細胞與成熟細胞不同的重要特點,，也可能是其復制生命期限遠比體細胞長的原因。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1、H BV ,、H C V ,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： 明膠(0.1%)
培 養(yǎng) 基 ： 含LIF、BM P,、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 短梭形、多角形
傳代特性 ： 可傳3-5代左右
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.025% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣,，95% ,；C O2，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通,。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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