大鼠浦肯野細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠浦肯野細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) ：YLK-XB1274h
組織來(lái)源 ：小腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
浦肯野細(xì)胞分離自小腦皮質(zhì)組織,；小腦的表面被覆著一層灰質(zhì)，叫小腦皮質(zhì),，小腦皮質(zhì)分為3層,，從表及里分別為分子層、浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層,。皮質(zhì)里含有星狀細(xì)胞,、籃狀細(xì)胞、浦肯野細(xì)胞,、高爾基細(xì)胞和顆粒細(xì)胞等5種神經(jīng)元,。浦肯野細(xì)胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)唯yi的傳出纖維，終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核,。浦肯野細(xì)胞(Purkinje cell)是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的唯YI能夠傳出沖動(dòng)的神經(jīng)元,。
人的小腦皮質(zhì)約有1500萬(wàn)個(gè)浦肯野細(xì)胞。浦肯野細(xì)胞還廣泛分布于心室,。顯著的電生理特點(diǎn)是傳導(dǎo)性強(qiáng),，傳導(dǎo)速度快，可達(dá)4000m m /s,。屬快反應(yīng)自律型細(xì)胞,，具有舒張期自動(dòng)除極化的性能，因而有自律性,，但自律性強(qiáng)度明顯低于竇房結(jié)P細(xì)胞,。這類細(xì)胞常常平行排列，細(xì)胞內(nèi)電阻低,，只有心室細(xì)胞的1/3,。小腦：浦肯野細(xì)胞是小腦皮質(zhì)中最大的神經(jīng)元，細(xì)胞體呈梨形,，頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹(shù)突,，向外伸入分子層。
主樹(shù)突沿途分支繁茂,，形如展開(kāi)的,、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長(zhǎng)軸垂直的平面上,。樹(shù)突分支上有大量的樹(shù)突棘,，與傳入纖維構(gòu)成廣泛的突觸聯(lián)系,，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細(xì)胞底部(與主樹(shù)突相對(duì)方向)發(fā)出,，細(xì)長(zhǎng),，離開(kāi)胞體不遠(yuǎn)便形成有髓神經(jīng)纖維，向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開(kāi)皮質(zhì)進(jìn)入白質(zhì),，組成小腦皮質(zhì)唯yi的傳出纖維,，終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團(tuán)。一個(gè)浦肯野細(xì)胞的軸突約形成500個(gè)終末膨大,，約與小腦深部核團(tuán)的35個(gè)神經(jīng)元形成突觸,。
心臟浦肯野細(xì)胞常常平行排列，幾個(gè)細(xì)胞互相以漿膜連接排成一個(gè)小束,，小束外包繞著基底膜,。細(xì)胞內(nèi)含肌原纖維很少，胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒,、線粒體和肌漿網(wǎng),，細(xì)胞內(nèi)電阻低，只有心室細(xì)胞的1/3,。
浦肯野細(xì)胞內(nèi)無(wú)橫管系統(tǒng),，但膜電容比收縮細(xì)胞大，可能是由于其閏盤結(jié)構(gòu)廣泛而復(fù)雜,，提供了較大的表面積的緣故,。浦肯野細(xì)胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少,，這些可能是構(gòu)成浦肯野細(xì)胞傳導(dǎo)快的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ),。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： PLL(0.1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ： 含脂質(zhì)濃縮液,、BSA 、M onothiogly cerol,、T ran sferrin、Penicillin ,、 Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 ： 不增殖,；不傳代
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣,，95% ；C O2,，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱),。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被,。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
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