大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞
產品名稱 ：大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞
產品貨號 ：YLK-XB1221h
組織來源 ：椎間盤組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織,。椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板,、纖維環(huán),、髓核組成的一個密封體,。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面,。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構成,，位于髓核的四周,。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織,，能承受較大的彎曲和扭轉負荷,。纖維環(huán)的前側及兩側較厚，而后側較薄,。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶,，后側的后縱韌帶較窄、較薄,。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/m m 3,，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞,，內層細胞呈圓形,，主要屬于軟骨細胞。
在培養(yǎng)的情況下,，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現(xiàn),，它們的核較圓，核仁較明顯,。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網,。細胞質內線粒體多，為橢圓形,，有的可看到雙層單位膜,，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒,，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少,，纖維環(huán)的生物性能就會減弱,，椎間盤開始退變。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1、H BV ,、H C V ,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：梭形,、多角形
傳代特性 ：可傳5代左右。3代以內狀態(tài)最佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% ,。C O2，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化,。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內,。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱),。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和公司技術部溝通,。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決,。
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