大鼠牙周膜成纖維細胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠牙周膜成纖維細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1215h
組織來源 ：牙周膜組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
牙周膜成纖維細胞分離自牙周膜組織,。牙周膜(牙周韌帶、牙周間隙) 是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成,。多數(shù)纖維排列成束,，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi),，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi),。牙周膜內(nèi)有神經(jīng),、血管、淋巴和上皮細胞等,。
成纖維細胞(Fibroblast) 是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,。成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。
剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起。6h后細胞基本貼壁wan全,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團。細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,。
細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細胞(PLFs) 作為牙周膜的主體細胞,，是牙周膜主要的間質(zhì)細胞,，它不僅具有合成膠原、基質(zhì),、彈力纖維和糖蛋白的功能,，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變,、修復及再生過程?，F(xiàn)在，利用牙周膜細胞建立體外模型,，已經(jīng)成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段,。
細胞特性
1)細胞來源于實驗動物的正常牙組織。
2)細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%,。
4)不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：成纖維樣細胞,，貼壁培養(yǎng),。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：成纖維細胞樣
傳代特性 ：可傳5代左右,。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% 。C O2,，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱),。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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