大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1193h
組織來源 ：結(jié)腸組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
結(jié)腸黏膜上皮細胞分離自結(jié)腸組織,。結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁,，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M ",，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為 ：黏膜(上皮層,、固有層、黏膜肌層) ,，黏膜下層(疏松結(jié)締組織) ,，肌層(內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑肌) ,，外膜(纖維膜或漿膜) ,。
腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機體面對病原微生物的第一道防線,。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外,，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,，在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關鍵作用,，它決定黏膜免疫反應的發(fā)生、性質(zhì)和強度,。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細胞的分離,、體外培養(yǎng)方法，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型,。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常結(jié)腸組織,。
2)細胞鑒定：細胞角蛋白-18（CK-18）免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%,。
4)不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌,。
5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞,，不規(guī)則細胞,，貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1、H BV ,、H C V ,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：上皮細胞樣
傳代特性 ：可傳1-2代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% ,。C O2,，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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