大鼠表皮成纖維細胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠表皮成纖維細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1178h
組織來源 ：皮膚組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
表皮成纖維細胞分離自皮膚組織,。皮膚組織來源包括頭部、臉部,、手,、腳、腿、背部,、腹部,、包皮等體表部位皮膚，可依據(jù)需求選用,。
表皮位于動物皮膚的外層,，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用,。表皮是皮膚的淺層結構,，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層,，即基底層,、棘層、顆粒層,、透明層和角質層,。成纖維細胞(Fibroblast) 是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。
成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化,。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。
30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,。6h后細胞基本貼壁好后，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長，不聚集成團,。細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細胞質透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：成纖維細胞樣
傳代特性 ：可傳5代左右,。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% ,。C O2,，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱),。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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