大鼠神經(jīng)干細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠神經(jīng)干細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) ：YLK-XB1167h
組織來(lái)源 ：腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
神經(jīng)干細(xì)胞分離自腦皮層組織,。大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì)) 覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì),。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3) ,、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積) ,。半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回,，它們大大增加了大腦的表面積,。大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂,、頂枕裂和中央溝,。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉,、頂葉,、顳葉、枕葉四大部分,。神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元,、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新,，并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。
神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細(xì)胞,，它可以通過(guò)不對(duì)等的分裂方式產(chǎn)生神經(jīng)組織的各類細(xì)胞,。需要強(qiáng)調(diào)的是，在腦脊髓等所有神經(jīng)組織中,，不同的神經(jīng)干細(xì)胞類型產(chǎn)生的子代細(xì)胞種類不同,，分布也不同。神經(jīng)干細(xì)胞作為干細(xì)胞的一種,，它具有其它所有干細(xì)胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力,，具有多種分化潛能，具有分化為本系統(tǒng)大部分類型細(xì)胞的能力,，這種自我更新和分化潛能可以維持相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間甚至終生,，對(duì)損傷和疾病具有反應(yīng)能力。
神經(jīng)干細(xì)胞在疾病,、損傷狀態(tài)下具有增殖,、遷移，并向神經(jīng)細(xì)胞,、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力,，已成為神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)和再生研究的熱點(diǎn),，體外建立穩(wěn)定的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)模型是其基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用的前提。神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)3-4d后,，可形成神經(jīng)球,，神經(jīng)球在培養(yǎng)基中呈懸浮生長(zhǎng)，予以更換半量培基,，1周后用吸管輕柔吹打球形克隆成為小的神經(jīng)球和單細(xì)胞懸液,，將部分細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，2×105個(gè)細(xì)胞/瓶,，每7-10d傳代1次,，每隔3d離心更換半量培養(yǎng)基1次，培養(yǎng)條件不變,。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1,、H BV ,、H C V 、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含B-27 Supplem ent,、EG F,、bFG F、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ：懸浮
細(xì)胞形態(tài) ：球形
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶,，A ccutase
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% ,。C O2,，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,，胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決。
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