大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB1149h
組織來源 ：視網(wǎng)膜組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介：
視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織。視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜,。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離,。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞,、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用,。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,，由外向內(nèi)分別為 ：色素上皮層、視錐,、視桿細(xì)胞層,、外界膜,、外顆粒層、外叢狀層,、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,、神經(jīng)纖維層,、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,，有感光作用。
后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成,。第一神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光,，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞,。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處最多,。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,，約有10到數(shù)百個視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用,。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū)，其分辨能力Z強(qiáng),。視網(wǎng)膜色素上皮(RPE) 位于脈絡(luò)膜和光感受器細(xì)胞外節(jié)之間,，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水,、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道,。主要是由單層色素上皮細(xì)胞所構(gòu)成，排列十分規(guī)則,。
視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃/醇循環(huán),，吞噬脫落的光感受器細(xì)胞外節(jié)以維持光感受器細(xì)胞興奮性，并分泌多種生長因子,，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和光感受器細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性,。細(xì)胞呈多角形,，細(xì)胞分為三部分，即頂部,、體部和 基底部,。視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞無再生能力，細(xì)胞死亡后不被替換,，而是鄰近的細(xì)胞向側(cè)面滑動,，以填補(bǔ)死亡細(xì)胞遺留下來的空間。視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細(xì)胞外節(jié)之間,，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子,、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道,。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃/醇循環(huán),，吞噬脫落的光感受器細(xì)胞外節(jié)以維持光感受器細(xì)胞興奮性，并分泌多種生長因子,，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和光感受器細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性,。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白-8(CK-8)免疫熒光染色為陽性,。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。
4)不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌,。
5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng),。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：上皮細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳1-2代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% ,。C O2，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱),。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
4
化工儀器網(wǎng)