大鼠破骨細胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠破骨細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB1128h
組織來源 :骨髓組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
破骨細胞分離自骨組織和骨髓,;破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞,位于骨組織表面的淺凹處,。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng),,其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡,,若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化,。因此多數(shù)學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構、功能探討骨吸收,,形成相互平衡的機制,。但破骨細胞是一種終末分化細胞,,屬于不增殖細胞群,不能增殖和傳代,,只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短,。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常關節(jié)組織。本細胞為終末分化細胞,,增殖能力很弱,,建議客戶收到細胞后直接用于后續(xù)實驗,不要進行擴增培養(yǎng),。
2)細胞鑒定:抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)為陽性,。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:圓形,,不規(guī)則細胞,,貼壁培養(yǎng)。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有H IV -1、H BV ,、H C V ,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細胞形態(tài) : 多核、巨細胞
傳代特性 : 屬于終末分化細胞,;屬于不增殖細胞群
消 化 液 : 0.25%胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細胞后,,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,,拆下封口膜,,放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,,吸出多余胰蛋白/酶消化液,,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,,待細胞回縮變圓后,,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,,1000rpm,,離心5min,保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,,接種于新的培養(yǎng)瓶內,。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱),。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,,以增強細胞貼壁性,,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,,請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),,便于和公司技術部溝通,。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。