大鼠成骨細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠成骨細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB1113h
組織來(lái)源 :顱骨組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
成骨細(xì)胞分離自顱骨組織,。顱骨位于脊柱上方,,由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外,,其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié),,起著保護(hù)和支持腦、感覺(jué)器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用,。顱分腦顱和面顱兩部分,。腦顱位于顱的后上部,內(nèi)有顱腔,,容納腦,,共8塊。面顱為顱的前下部分,,包含眶,、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu),,構(gòu)成面部的支架,,共15塊。
成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞,,負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成,、分泌和礦化。骨不斷地進(jìn)行著重建,,骨重建過(guò)程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域,,分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì),分泌蛋白酶消化骨基質(zhì),,形成骨吸收陷窩,。其后,成骨細(xì)胞移行至被吸收部位,,分泌骨基質(zhì),,骨基質(zhì)礦化而形成新骨。破骨與成骨過(guò)程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細(xì)胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機(jī)制,、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ),,也是藥物篩選、生物材料開(kāi)發(fā)和生物工程研究的重要手段,。
細(xì)胞特性
1)組織來(lái)源于幼年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的顱骨組織,。
2)細(xì)胞鑒定:堿性磷酸酶(ALP)化學(xué)染色。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。
4)不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌,。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:長(zhǎng)梭狀,,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng),。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1,、H BV ,、H C V 、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :梭形,、多角形
傳代特性 :可傳5代左右。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,,95% ,。C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,,放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察,,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,,置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細(xì)胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,,1000rpm,離心5min,,保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,,用5ml完培基重懸沉淀,,接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),,需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),,依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,,胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,,記錄細(xì)胞狀態(tài),,便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,,以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決。