小鼠膀胱成纖維細胞
產(chǎn)品名稱 :小鼠膀胱成纖維細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0782h
組織來源 :膀胱組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
膀胱成纖維細胞分離自膀胱組織。膀胱是一個儲尿器官,,在哺乳類動物,,它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu),位于骨盆內(nèi),,其后端開口與尿道相通,。膀胱與尿道的交界處有括約肌,,可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成,,由內(nèi)向外為黏膜層,、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成,,稱為逼尿肌,,逼尿肌收縮,可使膀胱內(nèi)壓升高,,壓迫尿液由尿道排出,。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,形成尿道內(nèi)括約肌,。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口,,防止尿液自膀胱漏出。
膀胱壁分為三層 :
即漿膜層(蜂窩脂肪組織) ,、肌肉層(逼尿肌,、膀胱三角區(qū)肌) 和黏膜層(極薄的一層移行上皮組織) 。成纖維細胞(Fibroblast) 是 疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,,細胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,,在一定條件下,,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化。成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。
剛分離的膀胱成纖維細胞呈圓形、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起,。6h后細胞基本貼壁wan全,伸展成梭形,,胞核清晰,,分布較均勻,,散在生長,不聚集成團,。細胞生長迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,,平坦、胞體較大,,細胞質(zhì)透明,細胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。膀胱成纖維細胞分泌的生長因子是一種具有多功能的促有絲分裂原,,研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程,。近年來,堿性成纖維細胞生長因子在膀胱癌發(fā)病過程中的作用,、與生物學行為之間的關(guān)系以及治療上的應用已受到重視,。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :成纖維細胞樣
傳代特性 :可傳3代左右
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,,95% 。C O2,,5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細胞后,,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,,放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,,37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,,再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,,然后補充新鮮的完培至5mL,,置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,,離心5min,,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,,重懸沉淀,,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
4) 待細胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,,避免細胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%),,依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),,便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。