小鼠肝內膽管上皮細胞
產品名稱 ：小鼠肝內膽管上皮細胞
產品貨號 ：YLK-XB0757h
組織來源 ：肝臟組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
肝內膽管上皮細胞分離自肝臟組織。肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官,，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用,。肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置,，在右側橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機體位置和形態(tài)結構 ：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋,，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接,。通過控制激素調控的分泌和吸收,，在保持、調整和擴大膽小管的結構中發(fā)揮重要作用,，肝內膽管上皮細胞在先天性和獲得性免疫應答方面起著積極作用,。
肝內膽管上皮細胞約占肝細胞總數(shù)的5% ,，其在肝內膽道系統(tǒng)內形成復雜的網(wǎng)狀管形結構,。肝內膽管上皮細胞具有復雜的生理代謝功能，參與肝臟的代謝,、排泌,、免疫等生理過程，在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起一定的作用,。研究表明,，常見的肝內膽管病變例如原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等疾病,，都是以肝內膽管上皮細胞為病變靶位,，進而引起肝內膽管上皮損傷。因此,，了解正常肝內膽管上皮細胞的生物學特征和病變肝內膽管上皮細胞的病理特征對研究肝內膽管病變的發(fā)病機制,、診斷和治療具有重要意義。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常小腸組織,。
2)細胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）免疫熒光染色為陽性,。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞,，不規(guī)則細胞,，貼壁培養(yǎng)。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：上皮細胞樣
傳代特性 ：可傳1-2代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% 。C O2,，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內,。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱),。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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