人肺癌成纖維細胞
產(chǎn)品名稱 ：人肺癌成纖維細胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB0709h
組織來源 ：肺癌組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
肺癌成纖維細胞分離自肺癌組織,；肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮,，故亦稱支氣管肺癌,。肺癌可向四周乃至全身擴散。肺癌發(fā)病率和死亡率增長最快,，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一,。
近50年來許多國家都報道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的di一位,，女性發(fā)病率占第二位,，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不wan全明確,，大量資料表明,，長期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關(guān)系,。肺癌，其實不是一種病,，而是幾十種病的組合,，有多種亞型，多種特性,；根據(jù)肺癌細胞在顯微鏡下的形態(tài)特點，可以初步分為兩種類型：小細胞肺癌(SC LC )15% 和非小細胞肺癌(N SC LC )85% ,。
這兩種類型肺癌的生長特點,、擴散風險和治療方案均不相同。絕大多數(shù)肺癌是非小細胞肺癌,，約占85% ,。它又能進一步被分為三類，分別是：腺癌,，鱗癌和大細胞癌,。其中腺癌是最主要的類型，約占非小細胞肺癌中的50% ,。如果是不吸煙的女性患者,，幾乎全部都是腺癌。人肺癌成纖維細胞是肺癌組織中的癌相關(guān)成纖維細胞,，癌相關(guān)成纖維細胞(cancer associated fibroblast,，C A F)在腫瘤微環(huán)境中的重要作用已受到廣泛的重視。該細胞通過與癌細胞的直接接觸,、分泌多種因子以及對腫瘤基質(zhì)的改造,，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,、轉(zhuǎn)移甚至耐藥性的發(fā)生,。隨著研究的深入，有人提出C A F可能成為抗腫瘤/治療的新靶點,。然而C A F的分化來源多樣,，相應的形態(tài)和功能各異，因此深入了解C A F的分化來源有利于更全面地認識腫瘤發(fā)展的機制,，為臨床治療提供理論依據(jù),，體外培養(yǎng)肺癌成纖維細胞對肺癌研究有重要意義。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1、H BV ,、H C V ,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： 貼壁不包被
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 成纖維細胞樣
傳代特性 ： 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ,；C O2,，5%
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,，1000rpm，離心5min，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱),。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決
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