人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) ：YLK-XB0658h
組織來(lái)源 ：骨髓
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM SC ) 分離自骨髓,。骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許 多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌、病毒等,。某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。
因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨) 的骨髓腔和扁平骨(如髂骨) 的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓,。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞,，可以向骨,、軟骨、肌組織,、皮膚,、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。在骨髓中，BM SC 占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0. 001% -0. 1% ,，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,，在培養(yǎng)過(guò)程中，受貼壁時(shí)間,、種植密度,、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH 值等條件的影響,。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有H IV -1,、H BV ,、H C V 、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳3-5代左右,。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% 。C O2,，5%
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱),。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問(wèn)題得到解決,。
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