人腎足突細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：人腎足突細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB0576h
組織來源 ：腎組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介：
腎足突細(xì)胞分離自腎組織。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細(xì)血叢,，被鮑氏囊所包裹,，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球,。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi),，微血管受到高壓,，而加速了超濾作用(hyperfiltra tion) 的進行。
微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,，形成濾液,，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率,。足細(xì)胞(podocyte) 即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜(G B M ) 的外側(cè),，連同G BM 和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障,。足細(xì)胞特殊的解剖位置，使得其體內(nèi)研究較為困難,。又由于正常成年機體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞,，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀,，胞體較大,，由胞體伸出許多突起，又稱足突(FP) ,，呈指狀交叉復(fù)蓋于G BM 外表面,，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與G BM 相連。
足細(xì)胞在正常情況下可以分泌G BM 的主要組成成分,，IV 型膠原和纖維連接蛋白(FN ) ,。在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解G BM 作用的基質(zhì)金屬蛋白酶(M M P s) 和組織蛋白酶，從而在G BM 的代謝平衡中發(fā)揮重要作用,。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替,，形成了許多30-40nm 的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6nm 的裂孔隔膜,，即腎小球足突間裂孔隔膜,。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的最后屏障,，對于維持腎小球濾過屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用,。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
細(xì)胞形態(tài) ：上皮細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳1-2代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% ,。C O2，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系,，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。
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