人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0544h
組織來源 :結(jié)腸組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
結(jié)腸平滑肌細(xì)胞分離自結(jié)腸組織,。結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸,。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,,大部分固定于腹后壁,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M ",,將小腸包圍在內(nèi),。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為 :黏膜(上皮層、固有層,、黏膜肌層) ,,黏膜下層(疏松結(jié)締組織) ,肌層(內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑肌) ,,外膜(纖維膜或漿膜) 。結(jié)腸平滑肌細(xì)胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形,、外縱行平滑肌,。結(jié)腸運(yùn)動少而緩慢,對刺激的反應(yīng)也較遲緩,。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收,、腸道運(yùn)動和物質(zhì)分泌、誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等研究中起著重要的作用,。
結(jié)腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,,呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,,核卵圓形,、居中。2周后細(xì)胞匯合,,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,,胞漿豐富,有分枝狀突起,,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,,高低起伏。細(xì)胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀,。密度高時,,則排列為旋渦狀或柵欄狀。
傳代后細(xì)胞生長較快,,4-6天即可匯合,,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。結(jié)腸平滑肌運(yùn)動活性受到神經(jīng)遞質(zhì),、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié),。隨著現(xiàn)代胃腸動力學(xué)研究的進(jìn)展,對胃腸運(yùn)動的研究已從器官,、組織水平發(fā)展到細(xì)胞,、分子水平,要求在胃腸道單個平滑肌細(xì)胞標(biāo)本上來完成各種電生理,、藥理和分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn),。體外培養(yǎng)細(xì)胞,由于影響因素單一,,是研究細(xì)胞功能以及相應(yīng)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的基礎(chǔ),。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于人正常結(jié)腸組織。
2)細(xì)胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性,。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。
4)不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌,。
5)細(xì)胞生長方式:長梭狀細(xì)胞,貼壁培養(yǎng),。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1,、H BV ,、H C V 、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 :可傳5代左右。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,,95% ,。C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,,放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,,吸出多余胰蛋白/酶消化液,,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,,待細(xì)胞回縮變圓后,,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,,1000rpm,,離心5min,保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化,。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
4) 待細(xì)胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱),。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),,便于和公司技術(shù)部溝通,。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決,。