人外周血白細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :人外周血白細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB0537h
組織來源 :外周血
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
外周血白細(xì)胞分離自外周血。外周血是除骨髓之外的血液,,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,,再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,,在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。白細(xì)胞(Leukocyte) ,舊稱白血球,,血液中的一類細(xì)胞,。
根據(jù)白細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無特殊顆粒,可將其分為有粒白細(xì)胞和無粒白細(xì)胞,。前者常簡稱為粒細(xì)胞,,根據(jù)其特殊顆粒的染色特性,又分為中性粒細(xì)胞,、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞,,白細(xì)胞也通常被稱為免疫細(xì)胞。在顯微鏡下可以看到,,血細(xì)胞中體積比較大,、數(shù)量比較少,具有細(xì)胞核,。其主要作用是吞噬細(xì)菌,、防御疾病,。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有H IV -1,、H BV 、H C V ,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :懸浮
細(xì)胞形態(tài) :圓形
傳代特性 :不增殖,。不傳代
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% ,。C O2,,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,,拆下封口膜,放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察,,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,,置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,,1000rpm,離心5min,,保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,,用5ml完培基重懸沉淀,,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,,培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),,需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn),。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%),,依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,,胰/酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,,記錄細(xì)胞狀態(tài),,便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,,以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。