人氣管上皮細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 ：人氣管上皮細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 ：YLK-XB0521h
組織來源 ：氣管
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介：
人氣管上皮細(xì)胞分離自氣管組織,。氣管(T rachea) ，呼吸器官的一部分。為后壁略平的圓筒型管狀,。上端平第六頸椎下緣,，與環(huán)狀軟骨相連。向下至第四,、五胸椎體(相當(dāng)胸骨角平面) 交界處,，分左、右主支氣管,，分叉處稱為氣管杈,。
氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性,，軟骨為“C"字形的軟骨環(huán),，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來,，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接,，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜,，表面覆蓋纖毛上皮,，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出,，以凈化吸入的氣體,。
氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體,、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞,，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng),。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性,，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要,。
細(xì)胞特性
1) 細(xì)胞來源于人正常氣管組織,。
2) 細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）免疫熒光染色為陽性。
3) 不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。
4) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于 90%,。
5) 細(xì)胞生長方式：上皮樣,，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有H IV -1、H BV ,、H C V ,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：上皮細(xì)胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣,，95% ,。C O2，5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液,，37℃溫浴1-3min,。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml完培終止消化,。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的完培至5mL,，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,，用5ml完培基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗,。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
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