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小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒

                                                             (ELISA) 使用說明書

? 小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)的含量。

? 有效期：6個(gè)月

? 保存條件：2-8℃

? 本試劑盒僅供科研使用,，不得用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并che底洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

樣品收集,、處理及保存方法

1）血清 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2）血漿 EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒,。

3）細(xì)胞上清液 1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿 將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g 離心 10 分鐘,，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

注：標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測,。

備注：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：80、40,、20、10,、5,、2.5 U/L

2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),，可用樣本/稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

操作步驟

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL,；空白孔不加,。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min,。

5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置 1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物 A,、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min,。

7. 每孔加入終止液 50μL,，15min 內(nèi),，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計(jì)算出樣品的濃度。

試劑盒性能

1. 檢測范圍：2.5 U/L – 80 U/L,。

2. 靈敏度：Z低檢測濃度小于 0.1 U/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% ,。

注意事項(xiàng)

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響 OD 值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。

6. 在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

9. 不能使用過期產(chǎn)品,。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。

說明

由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。

1. 最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性,、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份,。

2. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限,、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考,。

3. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品,。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。

4. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本,。

5. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

6. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時(shí)間等,，所以可能存在檢測不出的情況。

7. 某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白,，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測出。