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MIHA正常人肝細(xì)胞

簡稱：MIHA

中文名：正常人肝細(xì)胞

別名：MIHA細(xì)胞,，正常人肝細(xì)胞

種屬：人

來源：肝

培養(yǎng)條件：DMEM

培養(yǎng)環(huán)境：空氣,，95%,； 二氧化碳 (CO2),，5%

狀態(tài)：貼壁

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：

1. 吸走多余培養(yǎng)基,，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞；

2. 吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA,，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細(xì)胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；

（細(xì)胞對于消化比較敏感,，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,，可以輕輕吹下時即可終止,，禁止消化到細(xì)胞*漂浮?；靹蚣?xì)胞時盡量輕柔,，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹下細(xì)胞混勻,；

4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清,，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定,，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代,。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min,，-20度2h，-80過夜后液氮保存,。

凍存方法：

1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管,；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存,；沒有程序凍存盒的實驗室,，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存,。

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