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DOK人口腔黏膜癌前病變細胞

簡稱：DOK

中文名：人口腔黏膜癌前病變細胞

別名：人口腔黏膜癌前病變細胞,；DOK細胞

種屬：人

來源：口腔異常增生,；男性

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：空氣,，95%,； 二氧化碳 (CO2)，5%

狀態(tài)：貼壁

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

細胞培養(yǎng)操作步驟：

1. 吸走多余培養(yǎng)基,，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,；

2. 吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細胞表面,，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化,；

（細胞對于消化比較敏感,，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長,。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮,?；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡,。）

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹下細胞混勻；

4. 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min,，棄上清,，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一,，具體傳代比例視細胞生長速度而定,，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代,。

注意事項：不同品牌胰酶消化時間差別較大,，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài),。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h,，-80過夜后液氮保存,。

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞,；
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管,；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存,；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存。

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