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基質(zhì)金屬蛋白酶ELISA kit

本試劑盒僅供研究使用,。

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人,、小鼠、大鼠,、倉(cāng)鼠,、豚鼠、豬,、兔子血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11),、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A),、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5),、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13),、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)活性,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11),、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A),、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5),、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13),、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)水平,。用純化的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1),、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5),、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10),、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入MMP-2，再與HRP標(biāo)記的MMP-2抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11),、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A),、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5),、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13),、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4),、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2),、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11),、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1),、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5),、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10),、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)活性濃度,。

試劑盒組成

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

       6．底物請(qǐng)避光保存,。

       7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

 8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

       9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

基質(zhì)金屬蛋白酶ELISA kit保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月

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