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細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)特征是細(xì)菌鑒定的重要依據(jù)，但其可受外界環(huán)境及細(xì)菌生長(zhǎng)周期等的影響而發(fā)生改變,，因此進(jìn)行細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查時(shí),，需考慮培養(yǎng)條件、標(biāo)本來(lái)源等因素,。

一,、顯微鏡觀察法

細(xì)菌形體微小，肉眼不能直接看到,，必須借助顯微鏡放大后才能觀察到,。

1.普通光學(xué)顯微鏡  普通光學(xué)顯微鏡(light microscope)以可見(jiàn)光為光源，波長(zhǎng)0.4~0.7μm,，平均約0.5μm,。其最大分辨率為光波波長(zhǎng)的一半，即0.25μm,。常用油鏡觀察細(xì)菌(放大1000倍),。為增加其與周?chē)h(huán)境的對(duì)比度，以便清楚觀察細(xì)菌的形態(tài)與部分結(jié)構(gòu),，需將細(xì)菌進(jìn)行染色,。

2.電子顯微鏡  電子顯微鏡(electrn microscope)是利用電子流代替可見(jiàn)光波，以電磁圈代替放大透鏡,。電子波長(zhǎng)極短,，約為0.005nm，其放大倍數(shù)可達(dá)數(shù)十萬(wàn)倍,，能分辨1nm的微粒,。不僅能看清細(xì)菌的外形，還可觀察內(nèi)部超微結(jié)構(gòu),。目前使用的電子顯微鏡有兩類(lèi)，即透射電子顯微鏡(transmission electron micxoscope,TEM)和掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope,SEM),。SEM的分辨率一般較 TEM 低,，但可清楚地觀察物體的三維形貌和表面結(jié)構(gòu)。配合電子顯微鏡觀察使用的標(biāo)本制備方法有磷鎢酸或鉬酸銨負(fù)染色,、投影法,、超薄切片,、冰凍蝕刻法等。電子顯微鏡標(biāo)本須在真空干燥的狀態(tài)下檢查,，故不能觀察活的微生物,。此外，還有暗視野顯微鏡(darkfield microscope),、相差顯微鏡(phase contrast microscope),、熒光顯微鏡(Huorescence microscope)和激光共聚焦顯微鏡(confocal laser scanning microscope)等，適用于觀察不同情況下的細(xì)菌形態(tài)和/或結(jié)構(gòu),。

二,、染色法

細(xì)菌體形小、半透明,經(jīng)染色后才能觀察較清楚,。細(xì)菌等電點(diǎn)為pH2~5,在中性或堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷,，易與帶正電荷的堿性染色劑結(jié)合而染上顏色。酸性染色劑不能使細(xì)菌著色,，而使背景著色形成反差,，故稱(chēng)為負(fù)染(negative staining)。

染色法有多種,，Z常用和最重要的分類(lèi)鑒別染色法是革蘭氏染色法,，由丹麥細(xì)菌學(xué)家漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram,1853-1938)于1884年創(chuàng)建。革蘭氏染色法是將標(biāo)本固定后,，先用堿性染料結(jié)晶紫初染,，再加碘液媒染，然后用95%乙醇脫色,，最后用稀釋復(fù)紅復(fù)染,，染成紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，染成紅色者為革蘭氏陰性菌,。革蘭染色法在鑒別細(xì)菌,、了解細(xì)菌致病性和指導(dǎo)選擇抗菌藥物等方面具有重要的意義。

細(xì)菌染色法中,，還有單染色法,、抗酸染色法以及莢膜、芽胞,、鞭毛,、細(xì)胞壁、核質(zhì)等特殊染色法,?？顾崛旧ㄖ饕糜诮Y(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌等抗酸性細(xì)菌的鑒別,。