植物玉米素核苷(ZR)ELISA試劑盒用于測定植物相關樣本中玉米素核苷(ZR)含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物玉米素核苷(ZR)水平,。用純化的植物玉米素核苷(ZR)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入玉米素核苷(ZR),,再與HRP標記的玉米素核苷(ZR)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的玉米素核苷(ZR)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),,通過標準曲線計算樣品中植物玉米素核苷(ZR)濃度,。
操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照相關內(nèi)容在小試管中進行稀釋,。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,,拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。
7.溫育:操作同3,。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘,。
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白孔調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實際濃度。
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