使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本 產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照,。
1.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6,，5,，4，3,，2,，1。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭， 下同,。
3. 在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,，在 4 號管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個樣品待提取,，最好設(shè)置 N+2 個提取,，多出的是 PC（樣品制備陽 性對照）和 NC（樣品制備陰性對照）?？梢匀￡栃詫φ盏?nbsp;1000 倍稀釋液 10μL 再加上一定量的水,，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作 為 PC,。另外用水作為 NC,。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容,。
三,、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進行）
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個 用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用 水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模 板）,。下面只以定量分析為例描述操作步驟,。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后最后加）
| 成分/每管 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管（1-6 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 榛子源性成分探針法 qPCR 引物-探針混合液 | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
| N+2 個待測 DNA 模板 | 7 μL | ||
| 超純水 | 7 μL | ||
| 第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 （1-6 號） | 7 μL（1 號樣到 1 號管,，2 號樣到 2 號管…） |
11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR：
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
| PCR 反應(yīng) （45 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 60 sec（采集 FAM 通道的熒 光信號） |
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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