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【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：黃熱病毒（YFV）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）

Name ：Diagnostic Kit for Yellow Fever Virus RNA(Real-Time RT-PCR Method)

【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒

【預期用途】 本試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標本中黃熱病毒 RNA,，適用于黃熱病毒感染的輔助診斷,。 其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】 本試劑盒用一對黃熱病毒特異性引物,，結合一條特異性熒光探針,，用一步法熒光 RT-PCR 技術對黃熱病毒 RNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷,。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用,。

【儲存條件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存,、運輸,、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月,。

【適用儀器】 ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2,、LightCycler480,、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

【標本采集】 疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,。

【保存和運輸】 上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月,，標本運送應采用 2~8℃冰袋運 輸，嚴禁反復凍融,。

【使用方法】 1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理 按 RNA 提取試劑盒說明書進行提取

1.2 核酸提取 推薦采用優(yōu)利科（上海）生命科學有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提 取,，請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)） 根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應管 數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份),，每測試反應體系配制如下表：

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中,，蓋好管蓋,，混勻， 短暫離心,。

4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi),； 設置好通道、樣品信息,，反應體系設置為 25ul,；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，請勿選擇 ROX 參比熒光,。

4.2 推薦循環(huán)參數(shù)設置：

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析 后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),，重新分析結果,。

5.2 結果判斷 陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,； 可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38,，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線,， 判定為陽性，否則為陰性,； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

6. 質(zhì)控標準 陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示； 陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效,。

7. 檢測方法的局限性 1.樣本檢測結果與樣本收集,、處理、運送以及保存質(zhì)量有關,； 2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果,； 3.陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導致假陽性結果； 4.病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會導致假陰性結果； 5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會導致假陰性結果,； 6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果,； 7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段,。

【注意事項】 1.所有操作嚴格按照說明書進行,； 2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心,； 3.反應液應避光保存,； 4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,； 5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服； 6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染,； 7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,； 8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理,。