【產(chǎn)品名稱】
禽漿膜炎（RA）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）
商品名稱：禽漿膜炎（RA）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）
Name ：Riemerella anatipestifer Detection Kit(Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒
【預(yù)期用途】
禽漿膜炎是由鴨疫里默氏桿菌引起的鴨,、鵝,、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病，也稱新鴨病,、鴨敗血癥,、鴨疫綜合征、鴨疫敗血癥和傳染性漿膜炎,。其主要病理特征是急性或慢性敗血癥,、纖維素性心包炎、肝周炎,、氣囊炎和腦膜炎,，還可以引起干酪性輸卵管炎、關(guān)節(jié)炎,、結(jié)膜炎等,。發(fā)病率為 5%～90%，病死率高達(dá)80%,，給世界養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,，鴨疫里氏桿菌病已成為危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要細(xì)菌性傳染病之一。
本試劑盒適用于檢測鴨疫里默氏桿菌病的肝臟,、脾臟等臟器組織中鴨疫里默氏桿菌 DNA 的檢測,，適用于鴨疫里默氏桿菌感染的輔助診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒對鴨疫里默氏桿菌特異核酸序列設(shè)計(jì)引物和探針,，用熒光 PCR 技術(shù)對鴨疫里默氏桿菌 DNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,，用于臨床上對可疑感染病料的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格25T/盒50T/盒
RA 反應(yīng)液500μL×1 管500μL×2 管
酶液25μL×1 管50μL×1 管
RA 陽性質(zhì)控品50μL ×1 管50μL ×1 管
陰性質(zhì)控品250μL ×1 管250μL ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃避光保存,，有效期 12 個月,。避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不超過 5 次,。
【適用儀器】
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。
【標(biāo)本采集】
按 NY/T 541 要求無菌采集發(fā)病鴨的肝臟或腦（有典型纖維素性滲出時采集肝臟,，有神經(jīng)癥狀時采集腦）,。
【保存和運(yùn)輸】
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h；若需長期保存,，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過 3 次。
【使用方法】
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
無菌取疑似鴨疫里默氏桿菌病的肝臟,、脾臟等臟器組織 1.0 g～5.0 g,，按 10%（g/mL）加入 PBS，研磨勻漿,。
-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
1.2核酸提取
推薦采用優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取,， 請按照試劑說明書進(jìn)行操作。
2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；樣品每滿
10 份，多配制 1 份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑RA 反應(yīng)液酶液
用量19μL1μL
將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管。
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻， 短暫離心,。
4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；
4.2設(shè)置好通道,、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通
道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可,。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號
11 cycle95℃2min否
245 cycles95℃15sec否
60℃30sec是
5.結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置,，以分析 ABI7500 儀器為例）
反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)器，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果,。
5.2結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值,。
5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無特異性擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示,；
陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
6.檢測方法的局限性
1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；
3.陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；
4.病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；
5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；
6.試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,；
7.本檢測結(jié)果僅供參考,，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項(xiàng)】
1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；
6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染,；
7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 山東省市場監(jiān)督管理局. DB37/T 3880-2020, 鴨疫里默氏桿菌病診斷技術(shù)規(guī)程[S].
提供商 |
優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
0次 |
資料大小 |
20KB | 資料類型 |
WORD 文檔 |
資料圖片 |
點(diǎn)擊查看 | 瀏覽次數(shù) |
324次 |
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
4
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)