禽腺病毒 E 型(FADV-E)核酸檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：禽腺病毒 E 型(FADV-E)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)
Name：Fowl Adenovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】25T/盒,、50T/盒
【預(yù)期用途】
禽腺病毒(Fowl Adenovirus, FADV)是無(wú)囊膜、線性雙股 DNA 病毒,屬于腺病毒科,、禽腺病毒屬成員,。該病毒可感染雞、火雞及其他禽類,。FADV 可致雞發(fā)生包涵體肝炎,、心包積水綜合征和肌胃糜爛等疾病。該病常與禽類其他病原混合感染,感染雞只可繼發(fā)再生障礙性貧血,、肝炎及產(chǎn)蛋量下降等,。FADV 呈世界性分布,病毒可經(jīng)糞-口途徑水平傳播,也可垂直傳播,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。
本試劑盒適用于檢測(cè)呼吸道分泌物棉拭子（感染 E 型禽腺病毒的雞,、火雞,、鵝、鵪鶉）,、卵巢,、輸卵管、卵泡,、子宮和輸卵管粘膜組織,、泄殖腔拭子（感染 E 型禽腺病毒的雞、鴨）等樣本中的禽腺病毒 E 型，用于禽腺病毒 E 型感染的輔助診斷,。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),，設(shè)計(jì)一對(duì)禽腺病毒 E 型特異性引物，結(jié)合一條特異性探針[1],，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)禽腺病毒 E 型的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),，用于臨床上對(duì)可疑感染病料的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格25T/盒50T/盒
FADV-E 反應(yīng)液500μL×1 管500μL×2 管
酶液25μL×1 管50μL×1 管
FADV-E 陽(yáng)性質(zhì)控品50μL ×1 管50μL ×1 管
陰性質(zhì)控品250μL ×1 管250μL ×1 管
說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃,，避光保存,、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,，有效期 12 個(gè)月,。
【適用儀器】
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀,。
【標(biāo)本采集】
病死禽取卵巢、輸卵管,、卵泡,、子宮和輸卵管粘膜組織；活雞取呼吸道拭子或泄殖腔拭子,，放于 1mL 50%
甘油生理鹽水中
【保存和運(yùn)輸】
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h,；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過(guò) 3 次,。
【使用方法】
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
組織樣品：稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后,，于研磨器中研磨,，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,，8000rpm 離心 2min,，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；泄殖腔拭子直接取 100μL 提取,。
1.2核酸提取
推薦采用公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取,， 請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。
2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑FADV-E 反應(yīng)液酶液
用量（樣本數(shù)為 N）19μL1μL
將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管,。
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,， 短暫離心。
4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；
4.2設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；
熒光通道選擇：檢測(cè)通道（ReporterDye）FAM,，淬滅通道（QuencherDye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX
參比熒光,，選擇 None 即可,。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)
11 cycle95℃2min否
245 cycles95℃15sec否
60℃30sec是
5.結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）
反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線）,，點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果,。
5.2結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無(wú) Ct 值,。
5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效,。
6.檢測(cè)方法的局限性
1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集,、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān),；
2.樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,；
3.陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,；
4.病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；
5.不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；
6.試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果,；
7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
【注意事項(xiàng)】
1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，完-全混勻并短暫離心；
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；
6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染,；
7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理,。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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