日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

ATP含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100管/48樣

注    意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

ATP廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨,，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù),。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài),。

測(cè)定原理：

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸,，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量,，以此反應(yīng)ATP含量。

自備儀器和用品：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板,、研缽和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

酸性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存,；

堿性提取液：液體60mL×1瓶,，4℃保存；

試劑一：粉劑×1支,，4℃保存,；臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

試劑二：液體1.5mL×1支，4℃保存,；

試劑三：粉劑×1瓶,，4℃保存；臨用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：液體5mL×1瓶,，4℃保存,；

試劑五：液體25mL×1瓶，4℃保存,；

標(biāo)準(zhǔn)液：液體10mL×1瓶,，2μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存,；

ATP提取：

1,、血清（漿）中ATP的提取：按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿）,，加入1mL酸性提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4 ℃離心10min,；取上清液至另一EP管中,，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻,，8000g 4 ℃離心10min,，取上清，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）,。

2,、組織中ATP的提取：按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,，8000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中,，加入等體積的堿性提取液使之中和,，混勻，8000g 4 ℃離心10min,，取上清,，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。

3,、細(xì)胞或細(xì)菌中ATP的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：酸性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL酸性提取液）,，超聲波破碎1min（冰浴,，強(qiáng)度20％或200W，超聲2s,，停1s）,，8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中,，加入等體積的堿性提取液使之中和,，混勻，8000g 4 ℃離心10min,，取上清,，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到700nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、顯色劑的配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用顯色劑體積（樣本數(shù)×0.2 m L），按試劑四(mL)：試劑五（mL）=1：5的比例配制,。用多少配多少,。

3、樣本測(cè)定：

充分混勻,，37℃準(zhǔn)確水浴30min

37℃水浴20min后,，700nm下測(cè)定各管吸光值

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管通常只需要各做一個(gè),。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

ATP含量計(jì)算：

1,、血清（漿）中ATP含量計(jì)算

ATP含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

2,、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中ATP含量計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr）=2×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr

蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定,。

（2）按樣本鮮重計(jì)算

ATP含量(μmol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=4×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

ATP含量(μmol/10⁴ cell）=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.008×(A測(cè)定管－A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)液濃度,，2μmol/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.01mL,；V2：加入提取液體積，2mL,；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,； W：樣本質(zhì)量,，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，500萬(wàn),。

注意：Z低檢測(cè)限為10nmol/mL或10nmol/g鮮重或0.1nmol/mg prot

提供商	優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司	下載次數(shù)	1次
資料大小	42.5KB	資料類型	WORD 文檔 免費(fèi)下載該資料
資料圖片	點(diǎn)擊查看	瀏覽次數(shù)	425次