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總糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                       微量法 100管/96樣

注   意 ：正式測(cè)定前請(qǐng)選擇2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

糖類(lèi)物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì),?？偺且部煞Q(chēng)為碳水化合物，包括可溶性的單糖,，二糖以及不溶性的淀粉,，纖維素，幾丁質(zhì)等,。

測(cè)定原理：

總糖酸水解為還原糖,，在NaOH和丙三醇存在下，DNS試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物,，在過(guò)量的NaOH堿性溶液中呈桔紅色,，在540nm處有最大吸收峰，以此測(cè)定樣品中的總糖含量,。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、沸水浴、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存,；

試劑二：液體100mL×1瓶 ，4℃保存,；

試劑三：液體5mL×1瓶 ,，4℃避光保存；

樣品中總糖的提?。?/p>

組織：稱(chēng)取約0.1g樣品,，加入1mL 試劑一，1.5mL蒸餾水,，勻漿,，95℃水浴中加熱30min，加入1mL試劑二,，混勻,，用蒸餾水定容至10mL，8000g 25℃離心10min,，取上清液待測(cè),。（注意稀釋?zhuān)?jiàn)注意事項(xiàng)）

液體樣本：取0.1mL樣本，加入1mL 試劑一,，1.5mL蒸餾水,，勻漿，95℃水浴中加熱30min,，加入1mL試劑二,，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè),。（注意稀釋?zhuān)?jiàn)注意事項(xiàng)）

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度,。

3,、加樣表：

混勻，置95度水浴中10min（蓋緊,，以防止水分散失）,，冷卻至室溫

混勻，540nm測(cè)定吸光值,，ΔA=A測(cè)定管-A空白管

注意：1,、空白管只要做一管,。

       2、如果ΔA大于2,，需要將上清液用蒸餾水稀釋?zhuān)?jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

總糖含量計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.3002x - 0.0507,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）,，y為吸光值。

2,、按樣本鮮重計(jì)算：

總糖（mg /g鮮重）= [(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（W×V1÷V2）×稀釋倍數(shù)=33.311×(ΔA＋0.0507) ÷W×稀釋倍數(shù),。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

總糖（mg /mg prot）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀釋倍數(shù)=3.3311×(ΔA＋0.0507) ÷Cpr×稀釋倍數(shù),。

V1：加入樣本體積,，0.008mL；V2：加入提取液體積,，10mL,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重，g,。

4,、按照液體體積計(jì)算：

總糖（mg /mL）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（V3×V1÷V2）×稀釋倍數(shù)=116.59×(ΔA＋0.0507)×稀釋倍數(shù)。

V1：加入樣本體積,，0.008mL,；V2：加入提取液體積，10mL/3.5mL,； V3:液體樣本,，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本鮮重，g,。

注意：Z低檢測(cè)限為1mg/g鮮重或10ng/mg prot

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