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血磷濃度檢測試劑盒說明書

                                                   微量法100T/96S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

血磷主要指血中的無機(jī)磷，以無機(jī)磷鹽的形式存在,。血漿中鈣,、磷濃度關(guān)系密切，在以mg/dL表示時,，二者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40,。當(dāng)(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織,；若(［Ca］×［P］)<35則妨礙骨的鈣化,，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用,。血鈣和血磷含量的相對穩(wěn)定依賴于鈣,、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡,。上述平衡受到維生素D3,、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié),。

測定原理：

去除血清中有機(jī)磷后，無機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸,，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色,，在620nm有光吸收；通過測定620 nm吸光度,，計算血液中磷含量,。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、可調(diào)式移液槍,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水,。

試劑組成和配置：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存。

試劑二：液體1.6mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存,。臨用前配制,，依次加入11mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二,，充分混合,。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1支，1 mmol/L無機(jī)磷,，4℃保存,。

血磷濃度測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到620 nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍,。

3. 血清預(yù)處理：吸取50 μL血清,，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm,，離心10min,，取上清液，待測,。

4. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板,，依次加入50μL蒸餾水,，50μL試劑一，100μL試劑三,，混勻后靜置10min,，于620 nm測定吸光度，記為A空白管,。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量石英比色皿/96孔板,，依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，50μL試劑一,，100μL試劑三,，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度,，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。

6. 測定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL上清液,，50μL試劑一,，100μL試劑三，混勻后靜置10min,，于620 nm測定吸光度,，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次,。

血磷濃度計算：

血磷含量（mmol/dL）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=2×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L,；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μL血清+950μL試劑一）÷50 μL血清=20；V樣總：100 mL=0.1 L,。

注意事項(xiàng)：

1,、   試劑三需臨用前配制，如未用完,，4℃保存,，最多可使用3天；

2,、   測定過程中,，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無機(jī)磷含量增高,。

3,、   Z低檢出限為10μmol/L。

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