土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-SC能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收，其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì),、氮,、磷含量，微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān),，是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo),。
測(cè)定原理：
S-SC催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng),，生成棕紅色氨基化合物,，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比,。
自備用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水,。
試劑組成和配制：
試劑一：甲苯1mL×1瓶，4℃保存,；（自備）
試劑二：液體7.5mL×1瓶,，4℃保存,；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存,；臨用前每瓶加入22mL蒸餾水充分溶解備用,；用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體22mL×1瓶,，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,，過(guò)30~50目篩,。
測(cè)定步驟和加樣表：
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.03 | 0.03 |
試劑一（μL） | 5 | 5 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn),，37℃水浴15min
試劑二（μL） | 75 | 75 |
試劑三（μL） | 220 | |
蒸餾水（μL） | 220 |
充分混勻,，放入37℃水浴培養(yǎng)24小時(shí),，10000 g,，4℃，離心5min,，取上清液
上清液（μL） | 85 | 85 |
試劑四（μL） | 215 | 215 |
充分混勻,，95℃水浴5min（蓋緊,，以防止水分散失），流水冷卻,，蒸餾水稀釋10倍（可以吸取100μL,，加入900μL蒸餾水稀釋,；若吸光度大于4,，可以加大稀釋倍數(shù)）,，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中510nm處讀吸光值A(chǔ),。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。
S-SC活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.9x -0.062,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）,，y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC活力單位,。
S-SC活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V反總÷W÷T =20.4×(ΔA+0.062)
10：稀釋倍數(shù),；T：反應(yīng)時(shí)間,，1d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣本質(zhì)量,，0.03g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.45x -0.062,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）,，y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC活力單位,。
S-SC活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷2.45×10×V反總÷W÷T =40.8×(ΔA+0.062)
10：稀釋倍數(shù),；T：反應(yīng)時(shí)間,，1d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL,；W：樣品質(zhì)量,，0.03g,。
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