土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（Soil-Fluorescein diacetate,，S-FDA）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機質(zhì)的轉(zhuǎn)化,，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一,。
測定原理：
FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,，并經(jīng)脫水反應(yīng),，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解,，并在 490nm 處有強吸收峰,，通過檢測 490nm 處的吸光值變化可計算得FDA 水解酶活性。
自備實驗用品及儀器：
天平,、低溫離心機,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板,、恒溫水浴鍋,。
試劑組成和配制：
標(biāo)準(zhǔn)液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存,。
試劑一：液體 40mL×1 瓶,，4℃保存。
試劑二：粉劑 1 瓶,，-20℃避光保存,，臨用前加 4mL 試劑三溶解。
試劑三：液體 40mL×1 瓶,，4℃保存,。
樣本處理：
稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g,，備用。
測定操作表：
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對照管 | 測定管 | |
樣本（g） | 0.05 | 0.05 | ||
標(biāo)準(zhǔn)液（μL） | 40 | |||
雙蒸水（μL） | 40 | |||
試劑一（μL） | 200 | 200 | 240 | 200 |
試劑二（μL） | 40 | |||
充分混勻,，30℃,，震蕩 1h | ||||
試劑三（μL） | 160 | 160 | 160 | 160 |
10000g，25℃,，離心 5min,，取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸 光值A，△A1=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,，△A2=A 測定管-A 對照管 | ||||
注 意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次,。
酶活性計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位,。
S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W
= 0.96×（△A2÷△A1）÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品：
標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/L,；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL,；W：樣本質(zhì)量,，g
注意事項：
1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性,。
2.測定之前進行預(yù)實驗,，若吸光值較高，請進行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定,，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù),。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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