土壤硝態(tài)氮試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。
測(cè)定意義：
硝態(tài)氮是指硝酸鹽中所含有的氮元素,，土壤中的有機(jī)物分解生成銨鹽，被氧化后變?yōu)橄鯌B(tài)氮,。土壤中硝態(tài)氮是高等植物吸收氮的主要形式之一,，其含量直接關(guān)系到作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。
測(cè)定原理：
在濃酸條件下,，NO3-與水楊酸反應(yīng),，生成硝基水楊酸,，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi),，其顏色深淺與含量成正比,，可比色測(cè)定計(jì)算得硝態(tài)氮含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
蒸餾水,、天平,、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板,、振蕩儀。
試劑組成和配制：
試劑一：粉劑×2支,，4℃避光保存,。臨用前根據(jù)用量每支加1mL濃硫酸充分溶解。
試劑二：液體50mL×1瓶,，4℃保存,。
樣本處理：
按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g新鮮土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水,，置于振蕩儀中振蕩提取1h,，25℃，10000g離心10min,，取上清待測(cè),。
測(cè)定操作表：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至410nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、 操作表（于EP管中加入下列試劑）
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣本（μL） | 10 | |
蒸餾水（μL） | 10 | |
試劑一（μL） | 20 | 20 |
充分混勻,，25℃靜置30min | ||
試劑二（μL） | 475 | 475 |
混勻，渦旋振蕩,，使出現(xiàn)的沉淀充分溶解,，轉(zhuǎn)移200uL至微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定410nm處吸光值A，△A=A測(cè)定管-A空白管 | ||
計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0156x+0.0073,，R2=0.9997
NO3—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總）
=64.1×（△A-0.0073）÷W
V樣總：加入提取液體積,，1mL，W：樣本質(zhì)量,，g
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0078x+0.0073,，R2=0.9997
NO3—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）
=128.2×（△A-0.0073）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL,，W：樣本質(zhì)量,，g
注意事項(xiàng)：
1. 硝酸根不為土壤膠體吸附,，且易溶于水，很容易在土壤內(nèi)部移動(dòng),，所以測(cè)定此指標(biāo)時(shí)應(yīng)注意采樣深度一致,。
2. 土壤經(jīng)風(fēng)干或者烘干很容易引起NO3—— N的變化，所以最好采用新鮮土壤進(jìn)行測(cè)定,，以準(zhǔn)確反映該指標(biāo)含量,。
3. 試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周,。
4. 試劑一和試劑二均具有強(qiáng)腐蝕性,，操作時(shí)需做好防護(hù)措施。
5. Z低檢出限為100μg/kg,。
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