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土壤無(wú)機(jī)磷（S-PHOS）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                              微量法100T/96S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：  

磷是植物必需大量元素,。植物主要通過(guò)根系從土壤中獲取磷元素,。土壤磷包括有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷。土壤有機(jī)磷經(jīng)過(guò)礦化分解而轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷,，才能進(jìn)一步被植物吸收利用,。

測(cè)定原理：

從土壤中提取無(wú)機(jī)磷，在酸性環(huán)境中,，通過(guò)鉬藍(lán)法定磷,，即可計(jì)算出無(wú)機(jī)磷含量。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量玻璃比色皿/96孔板,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋,，分析天平,、可調(diào)式移液器、蒸餾水和100目篩子,。

試劑組成和配制：

提取液：液體×1瓶,，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶,，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存,。臨用前配制,，加入8mL蒸餾水，充分溶解后加入4mL試劑二,，混勻,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，20μmol/L無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液,，4℃保存,。

土壤無(wú)機(jī)磷提取：

取10mL離心管,，加入精確稱取的100目篩子過(guò)篩的風(fēng)干土樣約0.01g,，加入1mL提取液,，震蕩混勻，然后置于40℃水浴浸提1h,，8000g,，25℃，離心10min,，取上清液,，待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 打開(kāi)水浴鍋,，調(diào)節(jié)溫度到40℃,。

3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水,，100μL試劑三,，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度,，記為A空白管,。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液,，90μL蒸餾水,，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min,，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。

5. 測(cè)定管：取EP管,，依次加入10μL上清液，90μL蒸餾水,，100μL試劑三,，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度,，記為A測(cè)定管,。

需在40min內(nèi)完成比色。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次,。

土壤無(wú)機(jī)磷含量計(jì)算公式：

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

S-PHOS（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W

 =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L,；V總：總上清液體積，1 mL=0.001 L,；W：土壤樣品質(zhì)量,，g,。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

S-PHOS（μmol /g干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W

                      =0.02×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；V總：總上清液體積,，1 mL=0.001 L,；W：土壤樣品質(zhì)量，g,。

注意事項(xiàng)：

1.        試劑三需臨用前配制,，限當(dāng)天使用。試劑三配制過(guò)程中,，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體,，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入,。

2.        40min內(nèi)完成比色,。

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