土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-AI在pH 為4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,，是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。
測(cè)定原理：
S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng),，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收,，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比,。
自備用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋,、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水,。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶,，4℃保存;
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存,；臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用,；用不完的試劑4℃保存;
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存,；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,，過(guò)30~50目篩。
測(cè)定步驟和加樣表：
試劑名稱(chēng)（μL） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.05 | 0.05 |
試劑一 | 400 | |
試劑二 | 400 |
混勻,， 37℃準(zhǔn)確水浴30min后,，95℃水浴10min（蓋緊，以防水分散失）,，流水冷卻后
充分混勻（以保證濃度不變）,，10000g 25℃離心10min，取上清液
上清液 | 200 | 200 |
試劑三 | 100 | 100 |
混勻,，95℃水浴10min（蓋緊,，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻,， 510nm處,，記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2,，可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),，ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。
S-AI活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL）,，y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)S-AI活力單位。
S-AI活力（mg/d /g土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V反總：反應(yīng)體系總體積：0.4mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，1/48d； W：樣本質(zhì)量,，0.05g,；1mg=1000μg。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL）,，y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)S-AI活力單位,。
S-AI活力（mg/d/g土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)
V反總：反應(yīng)體系總體積：0.4mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，1/48d,； W：樣本質(zhì)量，0.05g,；1mg=1000μg,。
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