土壤酸性木聚糖酶（Soil Acidic Xylanase,，S-ACX）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,，能催化水解木聚糖,，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,，降低釀造中物料的粘度,，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖,，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX一般分離自耐酸的真菌,，細菌及部分霉菌,。
測定原理：
ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進一步在沸水浴條件下與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),，在540nm處有特征吸收峰,，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率,，可計算ACX活力,。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機,、震蕩儀,、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板,。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體10mL×1瓶，4℃保存,。
試劑一：液體3mL×1瓶,，4℃避光保存,。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存,。
樣品處理
新鮮土樣風干,，過30-50目篩。
測定操作表：
1,、 分光光度計/酶標儀預熱30min,，調(diào)節(jié)波長至540nm。
2,、 操作表
對照管 | 測定管 | |
土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
緩沖液（μL） | 150 | 100 |
試劑一（μL） | 50 | |
混勻,，50℃震蕩反應(yīng)30min，立即90℃水浴10min,，8000g,，25℃離心10min，取上清100μL | ||
試劑二（μL） | 100 | 100 |
混勻,，90℃水浴中顯色5min,，取180μL于微量石英比色皿/96孔板測定540nm處吸光值A，分別記為A對照管,、A測定管,，△A=A測定管-A對照管。 | ||
S-ACX計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 2.5554x - 0.002 ,，R2 = 0.9983
酶活定義：50℃,，pH4.8條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位,。
S-ACX活力（μmol/d/g土樣）= （△A+0.002）÷ 2.5554 ×V反總×103÷ W÷T÷ 150
=18.78 ×（△A+0.002）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積,，0.15mL；T：反應(yīng)時間,，1/48d,；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量,。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.2777x - 0.002 ,，R2 = 0.9983
酶活定義：50℃，pH4.8條件下,，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位,。
S-ACX活力（μmol/d/g土樣）=（△A+0.002）÷1.2777×V反總×103÷ W÷T÷ 150
= 37.56 ×（△A+0.002）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL,；T：反應(yīng)時間,，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L,；150：木糖分子量,。
注意事項：
1. 保證震蕩反應(yīng)30min，使酶與底物充分接觸,。
2. 注意90℃水浴防止爆開,，以免改變反應(yīng)體系。
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