土壤酸性蛋白酶（Solid -Acid Protease,，S-ACPT）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸,、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一,。S-ACPT在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解,，與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān),。
測定原理：
酸性條件下,，S-ACPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下,，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍,；在680nm有特征吸收峰。
所需儀器及設(shè)備：
可見分光光度計/酶標儀,、水浴鍋,、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍,、微量石英比色皿/96孔板,、雙蒸水
試劑組成和配置：
液體一：1mL×1支，4℃保存,。
液體二：0.5mL×1支,，4℃保存。
試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=140（μL）：20（μL）：21（mL）的比例配制,，現(xiàn)配現(xiàn)用,，如出現(xiàn)白色絮狀沉淀則不能用,。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存,；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶,，4℃保存,；臨用前加入2mL試劑七，沸水浴加熱溶解,，然后加入8ml試劑一,，充分混勻備用，用不完的試劑4℃保存,；
試劑四：粉劑×1瓶,，4℃保存；臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用,；用不完的試劑4℃保存,；
試劑五：液體8mL×1瓶，4℃保存,；
試劑六：液體1.5mL×1支,，0.05mg/ml標準酪氨酸溶液，4℃保存,；
試劑七：液體5mL×1支,，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,，過30~50目篩,。
測定操作：
1、 試劑一的配制：見試劑的組成和配制,。
2,、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至680nm,，蒸餾水調(diào)零,。
3,、樣本測定：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
試劑一（μL） | 150 | |
試劑三（μL） | 150 |
混勻,，40℃水浴30min，振蕩5-6次,，使土樣與反應(yīng)液充分接觸
試劑二（μL） | 50 | 50 |
混勻,，8000g25℃離心10min，取上清液,，在EP管或96孔板中加入下列試劑
測定管 | 對照管 | 標準管 | |
上清液（μL） | 60 | 60 | |
試劑六（μL） | 60 | ||
試劑四（μL） | 280 | 280 | 280 |
試劑五（μL） | 60 | 60 | 60 |
混勻,，40℃水浴20min,，8000g 25℃離心10min，取上清液200μL,，680nm下讀取各管吸光值A
注意：標準管只需測一次,。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-ACPT活性計算：
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個 S-ACPT活力單位,。
S-ACPT(mg/d/g土樣)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷W÷T=24×(A測定管-A對照管)÷A標準管
C標準管：標準管濃度,，0.05mg/mL；V反總：反應(yīng)體系總體積,，0.2mL,；T：反應(yīng)時間，30min=1/48d,； W：樣本質(zhì)量,，0.02g。
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