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土壤汞（S-Hg）濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                               微量法100T/96S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

測(cè)定意義：

土壤汞污染能夠通過(guò)食物鏈傳遞和富集，對(duì)植物,、動(dòng)物和人類健康產(chǎn)生威脅,。礦山開(kāi)發(fā),、工業(yè)加工、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生活垃圾常常造成土壤汞污染,，因此評(píng)價(jià)和防止土壤重金屬污染常常需要測(cè)定土壤汞含量,。

測(cè)定原理：

土壤經(jīng)消化后，汞以Hg2+離子形式存在,；Hg2+能與二硫腙生成橙色絡(luò)合物,，溶于三氯jia烷后，在490nm測(cè)定吸光度,，即可計(jì)算S-Hg含量,。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板,、恒溫水浴鍋,、可調(diào)式移液槍、100目篩（可更?。饬蛩?、濃鹽酸,、濃硝酸、三氯jia烷和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支,，4nmol/mL Hg標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存,。

試劑一：自備,。在該試劑瓶中加入52mL蒸餾水，36 mL濃鹽酸,，12mL濃硝酸,，混勻，4℃避光保存,。

試劑二：粉劑×1瓶,，4℃避光保存。臨用前加18.4 mL蒸餾水充分溶解,。

試劑三：粉劑×1瓶,，4℃保存。臨用前加3 mL蒸餾水充分溶解,。

試劑四：粉劑×1支,，4℃保存。臨用前加1.5 mL蒸餾水充分溶解,。

試劑五：粉劑×1瓶,，4℃保存。臨用前加5.2 mL蒸餾水充分溶解。

試劑六：粉劑×1瓶,，4℃避光保存,。臨用前加20 mL三氯jia烷充分溶解。

S-Hg檢測(cè)：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,，體積波長(zhǎng)到490 nm,，三氯jia烷調(diào)零。

2. 樣品管：風(fēng)干的土壤,，過(guò)100目篩后精確稱取0.1 g左右,，裝入EP管；加入1 mL試劑一,，充分混勻后沸水浴消化60 min,。取出冷卻后室溫8000g離心10min，吸取20 μL上清液加入新的EP管,；再先后加入180 μL蒸餾水和20 μL濃硫酸,，混勻；最后加入180 μL試劑二,，混勻后40℃水浴24h,，期間震蕩數(shù)次。

2. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管,，加入20 μL標(biāo)準(zhǔn)液,，180 μL蒸餾水和20 μL濃硫酸，混勻,；最后加入180 μL試劑二,，混勻后40℃水浴24h，期間震蕩數(shù)次,。

3. 加入20 μL試劑三,，震蕩直到無(wú)色；開(kāi)蓋靜置30min,，期間搖蕩數(shù)次,，以排出氣體。

4. 加入10 μL試劑四,，充分混勻后靜置5min,；加入50μL試劑五，蓋緊后震蕩至少1min,，靜置10min以分層,。

5. 小心吸取20 μL下層溶液，加入200 μL試劑六,，震蕩使無(wú)色,，靜置10 min以分層,。

6. 小心吸取140 μL下層溶液，加入微量玻璃比色皿/96孔板,，于490nm處比色,，記錄各管吸光值。記為A樣品管和A標(biāo)準(zhǔn)管,。

注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次,。

S-Hg濃度計(jì)算公式：

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

Hg（nmol Hg/g 干重）=[C標(biāo)×(A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)]×V總÷V樣÷W

                     =200×(A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)÷W

C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，4 nmol/mL Hg,；V總：上清液總體積,，1 mL；W：土樣質(zhì)量,，g,；V樣：加入上清液體積，20 μL=0.02 mL,。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

Hg（nmol Hg/g干重）=[C標(biāo)×(A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)]×V總÷V樣÷W

                     =200×(A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)÷W

C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液濃度,，4 nmol/mL Hg；V總：上清液總體積,，1 mL,；W：土樣質(zhì)量，g,；V樣：加入上清液體積，20 μL=0.02 mL,。

注意事項(xiàng)：

1,、試劑一有刺激性氣味，易揮發(fā),，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意佩戴口罩和手套,，使用完立即蓋好蓋子，以免試劑不夠,；

2,、測(cè)定過(guò)程中需加入濃硫酸，加濃硫酸時(shí)需注意,，避免濺到皮膚或眼睛上,；

3、靜置分層后,，用1mL移液槍,，排除空氣后，輕輕插入下層溶液中,，緩慢吸取下層溶液,。

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