土壤α-葡萄糖苷酶（Solid-α-Glucosidase,，S-α-GC）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
S-α-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,，是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,，在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
測定原理：
S-α-GC能夠催化對-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,，后者在400nm有特征光吸收,。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水,。
試劑組成和配制：
試劑一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存,；（自備）
試劑二：粉劑×1瓶,，-20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水,，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存,；
試劑三：液體20mL×1瓶,，4℃保存；
試劑四：液體15mL×1瓶,，4℃保存,；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩,。
測定步驟：
1,、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2、 加樣表
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
試劑一（μL） | 10 | 10 |
室溫振蕩混勻15min | 90℃振蕩混勻15min | |
試劑二（μL） | 130 | |
蒸餾水 | 130 | |
試劑三（μL） | 160 | 160 |
混勻,， 37℃振蕩反應(yīng)1h后,，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失）,，流水冷卻,，
10000g 25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
上清液（μL） | 70 | 70 |
試劑四（μL） | 130 | 130 |
充分混勻,，室溫靜置2min后,， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管,。每個測定管設(shè)
一個對照管,。
S-α-GC活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0032x -0.0027,；x為標準品濃度（μmol/L），y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位,。
S-α-GC活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)
T：反應(yīng)時間，1h=1/24d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L,；W：樣本質(zhì)量，0.02g,。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.0027,；x為標準品濃度（μmol/L），y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位,。
S-α-GC活力（μmol/d /g 土樣）＝ (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)
T：反應(yīng)時間，1h=1/24d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L,；W：樣本質(zhì)量，0.02g,。
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