土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶,，由土壤微生物分泌。S-NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān),。
測(cè)定原理：
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,，后者在400nm有最大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性,。
自備用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水,。
試劑組成和配制：
試劑一：甲苯5mL×1瓶,，4℃保存；（自備）
試劑二：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用,，用不完的試劑仍-20℃保存,；
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存,；
試劑四：液體15mL×1瓶,，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,，過30~50目篩,。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、 加樣表
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
試劑一（μL） | 10 | 10 |
室溫振蕩混勻15min | 90℃振蕩混勻15min | |
試劑二（μL） | 130 | |
蒸餾水 | 130 | |
試劑三（μL） | 160 | 160 |
混勻,， 37℃振蕩反應(yīng)1h后,，90℃水浴5min（蓋緊，防止水分散失）,，流水冷卻,，
10000g 25℃離心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
上清液（μL） | 70 | 70 |
試劑四（μL） | 130 | 130 |
充分混勻,，室溫靜置2min后,， 400nm處測(cè)定吸光值A，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管,。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。
S-NAG活力計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.00645x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）,，y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反總÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)
T：反應(yīng)時(shí)間,，1h=1/24d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量,，0.02g,。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0043x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）,，y為吸光值,。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反總÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)
T：反應(yīng)時(shí)間,，1h=1/24d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量,，0.02g,。
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優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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39KB | 資料類型 |
WORD 文檔 |
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